| 组分 | PK203A（100 Preps） | PK203B（200 Preps） | 保存条件 |
|---|---|---|---|
| Nuclease-free H₂O | 3mL | 5mL | -20℃ |
| PCR Master Mix (2X) | 3mL | 5mL | -20℃ |
| Universal Primer Mix (10μM) | 500μL | 1mL | -20℃ |
| Positive Control A (Plasmid) | 10μL | 10μL | -20℃ |
| Positive Control B (Genomic DNA) | 100μL | 100μL | -20℃ |
1.适用范围:本试剂盒适用于LentiCRISPRv2、LentiGuide-Puro及同类型核心骨架载体(限人U6启动子)，其他骨架适配情况请咨询技术服务。
2.对照设置:建议每次反应设置Nuclease-free H₂O为阴性对照，以1uL Positive Control A或10uL Positive Control B为阳性对照。
3.注意事项:第一步PCR后必须进行纯化，以去除引物二聚体和非特异性产物，否则会严重影响第二步接头的连接效率;第二步PCR的引物和循环数需自行优化，推荐使用高保真酶并严格控制循环数;若需混合多个样本测序，务必在第二步PCR中引入不同的Index序列。本试剂盒不提供Index引物，请用户自备或咨询技术服务。
请将试剂盒置于-20°C条件下保存；使用前，各组分需充分融解、震荡混匀和离心。
本试剂盒的主要优势包括：
1、第一步使用通用引物对sgRNA区域进行特异性PCR扩增；第二步由用户根据自身测序平台自行设计添加含测序接头及Index的引物。将扩增与加接头解耦，完美适配Illumina、MGI等不同测序平台及各种Index组合。
2、 适用于以LentiCRISPRv2、LentiGuide-Puro等为骨架（人U6启动子+Scaffold均适配）的文库。既可用于CRISPR文库质粒的NGS测序质控（QC），也可用于CRISPR筛选所得的细胞/组织样本NGS测序建库。
3、试剂盒内置Positive Control A (Plasmid) 和 Positive Control B (Genomic DNA)，每次实验建议设置阴阳性对照，能够有效排除假阴性/假阳性，让实验结果更有保障。
4、说明书提供详尽的模板投入量与PCR体系配置指导（每1000条sgRNA配制4管50 μL PCR体系），确保每条sgRNA获得约500×覆盖度，保证测序数据质量。
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