| 组分 | EK301S | EK301M | 保存条件 |
|---|---|---|---|
| Stable Electrocompetent cells | 50 μL×5 | 50 μL×10 | -80℃ |
| Positive control (control vector，10 pg/μl) | 10μL | 10μL | -80℃ |
1. 对不稳定 DNA 片段的克隆或逆转录病毒 / 慢病毒载体的构建，涂板后平板应在30℃培养，以减少发生错误重组的概率。
2. 制备高纯度病毒质粒时，应使用新鲜转化的平板接菌，新鲜菌液提取质粒，菌液不可低温保存后提取质粒。
3. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中 10 分钟内加入目标 DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的 DNA 时应轻柔操作。加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。
4. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
5. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
6. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
7. 若转化大质粒或想获得高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
8. 对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl，pH 7.5；1 mM EDTA) 重悬产物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
9. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
-80℃
StableX电击感受态细胞只能用于电击转化，不可用于热激转化。StableX菌株是基于Stable3菌株开发的高转化效率菌株，是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株，特别适合慢病毒或具有末端重复序列DNA片段的克隆。基因组含有重组酶recA1 relA1突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；同时含有核酸酶endA1突变，避免了提取质粒过程中核酸酶的污染，大大提高了高纯度病毒质粒的产量和质量。lacZΔM15的存在使StableX可用于蓝、白斑筛选，此菌株具有四环素和链霉素抗性。研美生物开发的StableX电击感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种具有末端重复序列的复杂DNA文库构建，经特殊工艺制作，Positive control检测转化效率>1×10^10 cfu/μg DNA。
业务咨询：
售前客服
